Subaru Hasegawa memiliki ambisi untuk menjadi salah satu superstar bola basket terbaik sepanjang masa. Namun, ambisinya terhenti ketika tim bola basket sekolahnya menghentikan aktivitas selama setahun. Terkejut dengan berita itu, ia memutuskan untuk tidak lagi terlibat dalam bola basket.
Suatu hari, bibinya, Mihoshi Takamura, mengundangnya untuk melatih tim bola basket putri Akademi Keishin, dan ia dengan enggan setuju. Ia bertemu dengan siswi kelas enam Tomoka Minato, Maho Misawa, Airi Kashii, Hinata Hakamada, dan Saki Nagatsuki, dan mulai melatih mereka dalam olahraga tersebut dengan satu tujuan: mengalahkan semua lawan kuat di sepanjang jalan.
Ro-Kyu-Bu! mengikuti upaya lima siswi sekolah dasar dan pelatih mereka saat mereka meningkatkan gaya bermain bola basket mereka yang imut.
